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背景:
萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)是一种分子量为61kDa的蛋白,因其在宿主细胞中无背景萤光,同时无需翻译后修饰,检测快速、可靠和方便,是应用萤火虫荧光素酶报告基因系统检测的理想选择。Bio-One™ One-Step萤火虫荧光素酶分析试剂盒为针对萤火虫荧光素酶开发的一款快速、稳定、一致性良好的一步法检测试剂盒,具有较高的检测灵敏度,非常适合高通量和超高通量(96/384/1536孔)的检测哺乳动物细胞中萤火虫荧光素酶报告基因的表达。本试剂盒以D-荧光素(D-luciferin)为底物,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以被萤火虫荧光素酶催化进行氧化脱羧反应,产生激活态的氧化荧光素(Oxyluciferin),并产生生物萤光(Bioluminescence)(图1)。生物萤光与荧光素酶的启动子活性成比例,间接反映了细胞刺激物的生物学活性。
图 1. 萤火虫荧光素酶底物的发光原理
本试剂盒信号半衰期长达50min,不同荧光素酶检测试剂盒的发光值衰减对比如图2所示。
注意:实际读数会因细胞数量、转染效果、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
图 2. 不同荧光素酶检测试剂盒的发光值衰减对比。
产品规格:
名称 | 货号 | 规格 |
Bio-One™ One-Step萤火虫荧光素酶测定试剂盒 | RA-GL05 | 50mL |
试剂盒组分: | ||
• 荧光素酶反应底物(冻干粉) | 1Vial | |
• 荧光素酶反应缓冲液 | 50mL |
保藏条件:
采用冰袋运输。收到试剂盒后,可在-30 ~ -15℃长期保存,混合后的试剂反复冻融11个循环仍可保持稳定。
混合前:Bio-OneTM One-Step荧光素酶反应缓冲液可在室温保存90天(> 90%活性)或在2 ~ 8℃长期保存;
混合后:Bio-OneTM One-Step荧光素酶分析试剂可在室温保存1天(> 80%活性)或在2 ~ 8℃保存5天(> 85%活性)。为保证试剂出色的使用性能,未使用完的试剂建议-70℃保存。
特性:
Bio-OneTM One-Step萤火虫荧光素酶分析试剂盒具有操作简便、试剂稳定、一致性良好、灵敏度高等特点。
1.方便:将冻干粉底物与缓冲液简单混合即可使用,样品检测步骤简单;
2.快速:荧光素酶检测5-30min内完成;
3.更亮更持久的光信号:针对批处理和持续测量进行了优化,延长的强光输出时间有助于增加灵敏度,尤其是延长孵化时间的实验;
4.高灵敏度:能够检测最低10-20mol的荧光素酶;
应用:
Bio-One™ One-Step 萤火虫荧光素酶分析试剂盒主要适用于高通量和超高通量(96/384/1536孔)的检测哺乳动物细胞中萤火虫荧光素酶报告基因的表达,是抗体筛选、抗体质量控制的有效手段。同时,在对检测灵敏度有更高要求时,该试剂盒也可用于小分子化合物、重组蛋白药物活性的常规检测,如用于IFN、EPO、FSH、TSH、GH、GLP-1、PTH等药用蛋白的生物学活性检测。
注意事项:
我们也提供一系列ADCC、ADCP效应细胞株,详情请咨询techserv@goodchengshi.com,或者登陆公司官网www.goodchengshi.com 查询。
Q1:检测没有信号或者信号强度低
A1:
原因 | 解决方案 |
Bio-One™ One-Step 荧光素 酶测定试剂的低 活性或失效 | 1) 配制新的底物试剂,未使用完的试剂建议于-70℃保存。 2) 使用冻存的底物试剂进行检测时,需在25℃条件下避光解 冻并平衡至室温,颠倒混匀后使用 |
荧光素酶低表达 | 1)用不同的启动子、效应细胞或者培养条件提高表达; 2)扩大每孔中样品和试剂的体积/浓度; |
荧光素酶降解 | 加入底物试剂室温孵育5min后,进行荧光读数; |
化学发光检测仪 器不灵敏 | 选择对荧光素酶检测灵敏的检测仪器。 |
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