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背景:
报告基因检测是基因表达调节研究的重要手段,目前已被广泛应用于分子生物学及细胞生物学研究领域。报告基因检测法是一种将转录调控和报告基因(如荧光素酶)偶联表达,通过报告基因表达产物(如荧光素酶)活性的测定判断细胞刺激物(如小分子化合物、重组蛋白)生物学活性的方法,《中国药典》2015年版已将报告基因检测方法列为干扰素活性测定法第二法(通则3523)。目前在生物制品PD1/PD-L1、IL6/IL6R等相关单抗药物的生物学活性检测和Fc效应功能研究中,报告基因检测法已经起到了至关重要的作用。以往只能采用体内动物学活性研究的细胞因子如EPO、GH、FSH、TSH等,也在逐步采取体外报告基因检测法替代原有的动物体内法作为产品批放行的关键指标。转录调节与报告基因的表达相结合通常用于广泛的生理学研究,例如通过量化特定受体反应元件对基因表达的作用来分析受体功能,或者用来进行信号转导、转录因子、蛋白质与蛋白质相互作用和病毒感染和传播的研究,转录下游的事件,如mRNA加工和蛋白质折叠,也可以被分析。因此,荧光素酶被广泛应用于生物技术和制药行业。
萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)是一种分子量为61kDa的蛋白,因其在宿主细胞中无背景萤光,同时无需翻译后修饰,检测快速、可靠和方便,是应用萤火虫荧光素酶报告基因系统检测的理想选择。本试剂盒以D-荧光素(D-luciferin)为底物,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以被萤火虫荧光素酶催化进行氧化脱羧反应,产生激活态的氧化荧光素(Oxyluciferin),并产生生物萤光(Bioluminescence)(图1)。生物萤光与荧光素酶的启动子活性成比例,间接反映了细胞刺激物的生物学活性。
产品特点:
室温(22-25℃)下本产品的信号半衰期为30分钟;Bio-Bright™ One-Step萤火虫荧光素酶分析试剂盒具有操作简便、试剂稳定、超高的光输出、灵敏度高等特点。
1. 方便:将冻干粉底物与缓冲液简单混合即可使用,样品检测步骤简单;
2. 快速:荧光素酶检测2-15min内完成;
3. 超高的光输出:更强的光输出,可产生比其它荧光素酶检测试剂高至10倍的光强度;
4. 高灵敏度:能够检测最低10-20mol的荧光素酶。
产品规格:
名称 | 货号 | 规格 |
Bio-Bright™ One-Step萤火虫荧光素酶测定试剂盒 | RA-GL07 | 50ml |
试剂盒组分: | ||
• 荧光素酶反应底物(冻干粉) | 1Vial | |
• 荧光素酶反应缓冲液 | 50ml |
保藏条件:
采用冰袋运输。收到试剂盒后,可在-30 ~ -15℃长期保存。混合后的试剂,为保证试剂出色的使用性能,未使用完的试剂建议-70℃保存。
应用:
Bio-Bright™ One-Step 萤火虫荧光素酶分析试剂盒主要适用于需要超高光输出信号的萤火虫荧光素酶报告基因系统。
注意事项:
我们也提供一系列ADCC、ADCP效应细胞株,详情请咨询techserv@goodchengshi.com。
Q1:检测没有信号或者信号强度低
A1:出现这个问题的原因可能有以下几种:荧光素酶测定试剂的低活性或失效、荧光素 酶低表达等,对应的解决办法或注意事项如下:
原因 | 解决方案 |
Bio-Bright™ One-Step 荧光素 酶测定试剂的低 活性或失效 | 1) 配制新的底物试剂,未使用完的试剂建议于-70℃保存; 2) 使用冻存的底物试剂进行检测时,需在≤25℃条件下避光 解冻并平衡至室温,颠倒混匀后使用。 |
荧光素酶低表达 | 1)用不同的启动子、效应细胞或者培养条件提高表达; 2)扩大每孔中样品和试剂的体积/浓度。 |
化学发光检测仪 器不灵敏 | 选择对荧光素酶检测灵敏的检测仪器。 |
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