背景：

胰蛋白酶（Trypsin）属于丝氨酸蛋白酶家族，能特异性切割多肽链中赖氨酸和精氨酸残 基中的羧基。胰蛋白酶原由胰腺分泌，受肠激酶或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白 酶，是肽链内切酶。它不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、 磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用，是特异性最强的蛋白酶。

概述：

Rhinogen^® Quick™ Trypsin（Sequencing Grade）是利用重组大肠杆菌系统重组表达并经 过多步层析纯化得到重组胰蛋白酶。该酶经过甲基化修饰及突变，保证不自切，从而去 除了因自切而产生的假糜蛋白酶活性。酶的纯度≥95%，无糜蛋白酶等杂蛋白酶污染， 不需要 TPCK 抑制其他酶的活性。氨基酸序列与猪源胰蛋白酶同源，分子量大小约为 25kD，能特异性切割多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基。

产品包装：

Rhinogen^® Quick™ Trypsin（Sequencing Grade）包装规格如下：

配套试剂：

Quick™ Trypsin 酶及 Quick™ 反应增强剂以冻干粉形式提供。 

注：适配Rhinogen^® Quick™ Trypsin（Sequencing Grade）的 Quick™ 反应增强剂可单独购买， 货号：EB17。

产品来源：

Rhinogen^® Quick™ Trypsin（Sequencing Grade）是利用重组大肠杆菌系统表达生；产并 经过多步层析纯化得到的重组胰蛋白酶，其氨基酸序列与猪源胰蛋白酶序列同源，分子 量大小约为25kDa。

产品质量：

SDS-PAGE分析，纯度≥95%；没有检测到污染的蛋白酶活性。

产品特性：

最适反应pH：7.0~8.0。

保藏条件：

采用冰袋运输。收到产品后请立即将置于-20℃，密封防潮。酶溶解后，-70℃存放；若 溶解后存于2-8℃，需在24hr内使用完毕；Quick™ 反应增强剂冻干粉溶解后，-70℃可储 存一个月，2-8℃可储存一周。酶液及Quick™ 反应增强剂溶解后避免室温下长时间放置， 可进行分装，避免反复冻融。

应用：

1、在数分钟内完成抗体或蛋白的完全快速消化；

2、肽谱图、肽指纹谱或蛋白序列分析；

3、蛋白质组学研究；

4、 增加蛋白质序列覆盖率；

5、改善溶液内酶解方案。 

特性：

Rhinogen^® Quick™ Trypsin（Sequencing Grade）是一种高度纯化和非常稳定的重组蛋白酶，具有稳定性高、比活性高等特点。适用于蛋白质组学研究中肽谱图、肽指纹谱或蛋白序列分析。

1、高纯度：SDS-PAGE 分析，纯度≥95%；

2、高一致性：每批产品都经过严格的质量控制，以实现产品批间稳定性；

3、无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料；

4、超高效率：可显著缩短蛋白质酶解时间，在同一天内完成所有酶解工作，兼容液相色谱（LC）和 MS 分析。 

操作说明：

1. 胰蛋白酶的使用量为胰蛋白酶：目的蛋白=1:20~1:100（w/w），最适pH为7.0~8.0；

2. 反应体积可以按比例放大或缩小；

3. 在酶切反应体系中添加1mM CaCl₂，可以提高胰蛋白酶的活性；

4. 反应结束后，取少部分反应体系进行SDS-PAGE或者RP-HPLC检测，确认酶切效果。剩余反应体系置于冰浴或者冻存。若酶切不完全，则取出反应体系，置于37℃继续进行反应；

5. 对于不同的蛋白样品，需要实验摸索最适的酶浓度及反应时间。可用50mM NH₄HCO₃或者pH7.0-8.0的缓冲溶液进行酶液稀释；

6. 本产品仅供研究使用，不适用于人或动物的诊断及治疗用途。

Q1：是否可以调整样品预处理温度？

A1：加入QuickTM工作试剂后高温孵育后有利于底物的舒展，从而暴露更多的切 割位点。针对疏水蛋白，您可以提高孵育温度至90℃或接近100℃，但要关 注高温孵育是否会有沉淀产生。当您的底物孵育时发生沉淀，你可以选择适 当降低孵育温度，当然提高反应增强剂的浓度也可以有效缓解蛋白沉淀问 题。

Q2：复杂蛋白按照说明书操作不能有效快速消化时要如何操 作？

A2：我们说明书中推荐的快切试剂浓度浓度适用于大多数蛋白的快速消化。对于 按照上述操作仍不能有效完全快切的复杂蛋白（如膜蛋白等疏水性蛋白）， 可尝试参照下表提高快切试剂浓度。

同时，也可以尝试提高预处理温度、降低底物浓度、提高酶用量及延长反应 时间等。

Q3：水解QuickTM反应增强剂后检测的肽段覆盖率偏低是什么情况？

A3：当使用胰蛋白酶消化膜蛋白等疏水蛋白时，高度疏水的肽或蛋白质可能会与 QuickTM 反应增强剂降解产物共同沉淀，导致水溶液层含有的肽段覆盖率偏 低。如果您认为这是个问题，可减少QuickTM反应增强剂的使用量（如0.5× 或0.25×），并避免酸化。较低浓度的QuickTM反应增强剂不会干扰 LC/MS 和 MALDI-MS 分析。 同时，你可以尝试使用含异丙醇的水溶液来溶解沉淀物，提取出疏水肽段并 进行 LC/MS 分析。