背景:

内切糖苷酶 F3（Endo F3）可在寡糖N-连接的二乙酰基壳二糖聚糖核心中的两个N-乙酰葡糖胺残基之间进行切割，从而产生截短的糖分子，其中一个N-乙酰氨基葡萄糖残基则保留在天冬酰胺上。Endo F3对寡甘露糖和杂合分子没有活性。Endo F3可以较慢的速率切割非岩藻糖基化的双角和三角复合寡糖，但仅限于肽连接的寡糖。双角结构的核心岩藻糖基化可使其活性增加至400倍。核心岩藻糖基双角结构是Endo F3的有效底物，即使在游离的低聚糖中也是如此。Endo F3还可在游离和蛋白质连接的寡糖上对岩藻糖基化的三甘露糖核心结构进行切割。复合四角聚糖的天然去糖基化需要通过顺序水解为三甘氨酸二乙酰基壳二糖（Man3GlcNAc2）核心，然后再使用Endo F3进行切割。

Rhinogen^® Endo F3重组表达于E. coli，N端带MBP融合蛋白，C端带6×His标签。Rhinogen^® Endo F3 切割游离的或天冬酰胺连接的三触角或 α-(1-6) 岩藻糖基化的双触角寡糖，以及三氨糖基壳二糖核心结构。非岩藻糖基化的双触角聚糖也会被切割，但速度会降低 40 倍。它在寡糖的二乙酰壳二糖核心中的两个 N-乙酰氨基葡糖残基之间裂解，产生一个截短的糖分子，其中一个 N-乙酰氨基葡糖残基留在天冬酰胺上。相反，PNGaseF 可完整去除寡糖。α1-3 岩藻糖基化会抑制酶活性，且对寡甘露糖和杂合分子没有活性。

产品规格：

Rhinogen^® 内切糖苷酶 F3（Endo F3）包装规格如下：

配套试剂：

Rhinogen^® 内切糖苷酶 F3（Endo F3）配套提供的试剂如下：

产品来源:

Endo F3重组表达于E. coli，理论分子量约74 kDa，N端带MBP融合蛋白，C端带6×His标签。

产品质量:

1. 高纯度：通过SDS-PAGE检测，纯度≥90％；

2. 高活性：活性＞5U/ml；

3. 高稳定性：每批产品都经过严格的质量控制，以实现产品批间稳定性。

酶活定义:

在 37˚C、pH 4.5 条件下，在 1 分钟内催化 1μM猪纤维蛋白原释放 N-连接寡糖所需的酶量。

应用:

1. 糖组学；

2. 糖型分析及糖基化位点的确定；

3. 蛋白质组学；

4. 质谱应用。

保存条件：

采用冰袋运输，2-8℃可储存12个月。避免反复冻融。

使用注意事项：

1. 对于不同的糖蛋白样品，需要实验摸索最适的酶浓度及反应时间。

2. 反应体系可以线性扩大。

3. 为防止微生物污染，尽可能无菌取用。

4. 较高的酶浓度可以提高单个糖蛋白的消化效率，需要根据实际情况优化。

5. 适当分装以减少多次冻融带来的活性损失。

6. 本产品仅供研究使用，不适用于人或动的物诊断及治疗用途。

Q1:Endo F3良好的阳性对照是什么？

A1:猪纤维蛋白原是一种糖蛋白，含有岩藻糖基化双触角 N 连接聚糖，可用作 Endo F3 的阳性对照。

Q2:洗涤剂会抑制 Endo F3活性吗？

A2:Endo F3 只能在非变性（天然）条件下使用。去污剂，例如 SDS，会抑制 Endo F3 的活性。

Q3:Endo F3 活性的最佳pH 值是多少？

A3:Endo F3 裂解岩藻糖基化双触角（即猪纤维蛋白原）和三触角聚糖（即胎球蛋 白）的最佳 pH 值为 pH 4.5（10× Glycobuffer 4）。然而，岩藻糖基化的双触 角聚糖也可以在 pH 6.0（10× Glycobuffer 3）下被 Endo F3 裂解。

Q4：PNGase F 和 Endo F3 有什么区别？

A4：PNGase F 在来自 N 连接糖蛋白的高甘露糖、杂合和复合寡糖的最内层 GlcNAc 和天冬酰胺残基之间切割。而 Endo F3 对去除含有岩藻糖基化双触角和三触角 寡糖的糖蛋白壳二糖核心内的 N 连接聚糖具有高度特异性。