背景：

O-糖蛋白酶（O-Glycoprotease）重组表达于E.coli，C端带6×His标签。O-糖蛋白酶是一种O-糖蛋白特异性内切蛋白酶，可催化天然黏蛋白型O-糖基化蛋白中与O-聚体直接相邻的肽键的水解。

O-糖蛋白酶作为内切蛋白酶，高度特异性地在丝氨酸或苏氨酸的O-聚糖N端消化蛋白质。这就产生了N端携带O-糖链的糖肽，并使O-糖链分析、O-糖链定位和O-聚糖位点测定成为可能。

O-糖蛋白酶对唾液酸化的核心1 O-聚糖活性最高，对核心3 O-糖基化和α 2,3唾液酸化核心1的糖蛋白活性较差，与Tn抗原、核心2和α2,6唾液酸化核心1的O-聚糖位点无活性。仅仅只有N-聚糖修饰时，此酶不酶切。该酶对带有或不带有唾液酸的O-聚糖蛋白均有活性，在去唾液酸的O-聚糖蛋白上活性更高。此酶在pH 5.5-7.5之间均能保持较高活性，能耐1M NaCl，但对EDTA高度敏感（0.5mM EDTA），并且被Zn²⁺部分抑制。

产品包装：

Rhinogen^® O-糖蛋白酶（O-Glycoprotease）包装规格如下：

配套试剂：

配套提供的Rhinogen^® α2-3,6,8,9 Neuraminidase（EDTA-free）包装规格如下：

配套提供的试剂如下：

产品来源：

Rhinogen^® O-糖蛋白酶重组表达于E. coli，理论分子量约42KD，C端带6×His标签。

产品质量：

1. 高稳定性：每批产品都经过严格的质量控制，以实现产品批间稳定性；

2. 高纯度：通过SDS-PAGE检测，O-糖蛋白酶纯度≥90％，α2-3,6,8,9 Neuraminidase纯度≥95%。

产品特性：

O-糖蛋白酶（O-Glycoprotease）是一种O-糖蛋白特异性内切蛋白酶，可催化天然黏蛋白型O-糖基化蛋白中与O-聚体直接相邻的肽键的水解，位点在O-糖基化丝氨酸和苏氨酸残基的N端。 

酶活定义：

与α2-3,6,8,9Neuraminidase（EDTA-free）搭配使用，在20mM Tris-HCl，pH6.8条件下，37℃孵育2小时，1单位酶（1U）可消化1μg糖蛋白（TNFR）的≥90%，通过SDS-PAGE确认。 

储存条件：

采用冰袋运输，长期储存请置于-20℃，重悬后2-8℃可保存1个月。避免反复多次冻融。

应用：

1. O-糖基化分析；

2. O-聚糖谱；

3. O-聚糖位点测定。

Q1：已知的O-糖蛋白酶抑制剂有哪些？
A1：O-糖蛋白酶是一种金属蛋白酶，因此对螯合剂（如EDTA）高度敏感，浓度>5mM会导致酶的完全抑制。ZnCl2也部分抑制O-糖蛋白酶活性。

Q2：O-糖蛋白酶是否可以和唾液酸酶合用？
A2：是的，与唾液酸酶结合使用，可用于去唾液酸化和消化O-糖基化蛋白质，提高O-糖蛋白酶酶切效率。

Q3：必须要去除唾液酸吗？
A3：在唾液酸存在下，O-糖蛋白酶的活性显着降低，因此我们建议使用唾液酸酶去除唾液酸。或对您的样品尝试使用和不使用唾液酸酶条件下对比消化，以评估您的特定样品是否有必要去除唾液酸。

Q4：是否需要样品处于天然折叠状态？还是要进行变性处理？
A4：如果消化不充分，可能是由于样品的O-聚糖存在空间位阻，酶无法到达导致的。在这种情况下，我们建议尝试以下工作流程：还原、变性、羧甲基化、置换缓冲液，然后使用O-糖蛋白酶和唾液酸酶进行消化。