背景：  

在生物制品的制备/生产过程中，去除DNA残留是极为重要的。在过去几年里，重组蛋白类生物药物的发展突飞猛进，并且在未来依然前景广阔。在微生物系统中，这些重组蛋白一般都是通过微生物的发酵，并且通过裂解微生物细胞而释放出来。然而，在释放出目标产物的同时，细胞裂解物会同时产生一些杂产物，比如宿主细胞蛋白、核酸（DNA以及RNA）、细胞内毒素以及一些其他宿主细胞杂质。重组蛋白药物中的DNA残留可能会给患者体内带入激活的致癌基因，或者作为潜在的感染病毒DNA致使患者被感染。因此，DNA残留量是重组蛋白药物的一个重要的评价标准。世界上许多权威机构都对重组蛋白类药物中的宿主DNA残留量做出了严格的规定，对于每支疫苗中的DNA残留量，WHO规定不可以超过l0ng，美国FDA规定不可以超过l0pg，我国规定为l00pg以下。 

Nuclecut™ 全能核酸酶（SuperNuclease），是一种核酸内切酶，可将核酸降解成2~5个碱基的5'-单磷酸核苷酸，因其能高效降解任何形式（双链，单链，线状，环状）的DNA和RNA而没有蛋白裂解活性，因此被称为“全能核酸酶”。全能核酸酶能有效降低蛋白样品粘度，去除蛋白样品中核酸的污染，且无蛋白酶活性残留，Nuclecut™ 全能核酸酶活性达1×10⁶U/mg蛋白。全能核酸酶在降低粘性的同时，也具有多种其他用途，如：减少了样品处理时间、增加了蛋白产量、离心时沉淀和上清分离的更彻底、更便于溶液的离心（尤其是超滤）、提高色谱纯化的效率等。

概述：

该酶在0~42℃的均有活性，最适温度为37℃；有效的pH范围为6.0-10.0，最适pH为8.0；发挥活性需要Mg²⁺存在，1-2mM为最佳；在去污剂、SDS、尿素等存在下仍然保持一定活性。全能核酸酶可以非特异性裂解单链以及双链的DNA和RNA，并切割出一个3'-OH和5'-磷酸基。

产品包装：

Nuclecut™ 全能核酸酶（SuperNuclease）包装规格如下：

产品储存于20mM Tris-HCI，pH8.0，2mM MgCl₂，20mM NaCl和50%（v/v）甘油中，不添加防腐剂。

产品来源：

Nuclecut™ 全能核酸酶重组表达于E. coli，单体理论分子量约27.5KD，C端带6×His标签。

产品特性：

Nuclecut™ 全能核酸酶可非特异性降解所有形式的DNA和RNA（单链的、双链的、线性的和环化的），将核酸完全消化为长度为3至5个碱基的5'-单磷酸末端寡核苷酸。

产品质量：

1. 高纯度：通过SDS-PAGE检测，纯度≥90％；

2. 高稳定性：每批产品都经过严格的质量控制，以实现产品批间稳定性。

3. 无蛋白酶活性：偶氮酪蛋白法分析无蛋白酶活性。

储存条件：

采用干冰运输，收到产品后请立即将其置于-20℃保存。复溶后可适当分装以减少多次冻融带来的活性损失。

应用：

1. 从蛋白质和其他生物制剂中去除DNA / RNA；

2. 降低由核酸引起的粘度；

3. 在二维凝胶电泳和色谱中制备样品；

4. 防止细胞结块；

5. 降低哺乳动物细胞提取物的粘度；

6. 降低大肠杆菌细胞裂解液的粘度以增强过滤性。

Q1：什么样的质量/数量的酶对特定的应用是足够的?

A1：有几个参数如温度及酶切体系会影响酶的活性，因此最佳条件将因工艺而异，需要通过实验来确定。

Q2：实验过程中，我需要在哪一步加入全能核酸酶？如果在低温下工作，需要添加多少全能核酸酶？

A2：这取决于使用全能核酸酶的目的， 但一般情况下，酶的添加最好是在培养后和捕获步骤之前。在温度低于37℃时，酶的效率降低，补偿这种效率下降所需的量因过程而异，并取决于现有的其他参数。通常，增加另一个参数，如

孵育时间，可以在不需要增加酶用量的情况下进行补偿。

Q3：为什么全能核酸酶作用后没效果？什么会抑制其活性？

A3：全能核酸酶活性范围较广，而 1-2mM Mg2+ 的浓度对全能核酸酶的活性至关重要。Mn2+ 可以替代 Mg2+；在 Mg2+ 的存在下，酶活性达到最佳。一价阳离子浓度>300mM，磷酸盐浓度 >100mM ，以及硫酸铵浓度 >100mM 都会抑制约 50%的活性。此外，>1mM EDTA 浓度也会抑制全能核酸酶的活性。

Q4：酶活降低是为什么？

A4：全能核酸酶通常非常稳定 ，然而在极少数情况下，会导致活性丧失。可能原因有：

1）不可逆失活可能是由于样品中存在变性剂或蛋白酶，或是存储不当。

2）可逆失活通常是由于螯合剂的存在，如 EDTA ，它可以螯合去除活性必需的镁离子。