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背景:
萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)是一种分子量为61kDa的蛋白,因其在宿主细胞中无背景萤光,同时无需翻译后修饰,检测快速、可靠和方便,是上述应用中报告基因的理想选择。Bio-SteadyTM One-Step萤火虫荧光素酶分析试剂盒为针对萤火虫荧光素酶开发的一款发光稳定、适合高通量筛选的一步法检测试剂盒,本试剂盒以D-荧光素(D-luciferin)为底物,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以被萤火虫荧光素酶催化进行氧化脱羧反应,产生激活态的氧化荧光素(Oxyluciferin),并产生生物萤光(Bioluminescence)(图1)。生物萤光与荧光素酶的启动子活性成比例,间接反映了细胞刺激物的生物学活性。
图1. 萤火虫荧光素酶底物的发光原理
本试剂盒在常用的细胞培养基中可提供超过5小时的信号半衰期,并且不需要样品预处理。在标准实验室条件下,每小时可实现数千个样品的吞吐率,并且具有很高的重现性,非常适合高通量和超高通量(96/384/1536孔)的检测哺乳动物细胞中萤火虫荧光素酶报道基因的表达。可以检测最低10-20mol的荧光素酶,在10-20至10-14mol的酶浓度范围内呈很好的线性关系。不同荧光素酶检测试剂盒的发光值衰减对比如图2所示。
注意:实际读数会因细胞数量、转染效果、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
图2. Rhinogen® 不同荧光素酶检测试剂盒的发光值衰减对比
产品规格:
名称 | 货号 | 规格 |
Bio-Steady™ One-Step萤火虫荧光素酶测定试剂盒 | RA-GL06 | 50mL |
试剂盒组分: | ||
• 荧光素酶反应底物(冻干粉) | 1Vial | |
• 荧光素酶反应缓冲液 | 50mL |
应用:
Bio-Steady™ One-Step 萤火虫荧光素酶分析试剂盒主要适用于高通量和超高通量(96/384/1536孔)的检测哺乳动物细胞中萤火虫荧光素酶报告基因的表达,是抗体筛选、抗体质量控制的有效手段。
注意事项:
我们也提供一系列ADCC、ADCP效应细胞株,详情请咨询techserv@goodchengshi.com,或者登陆公司官网www.goodchengshi.com 查询。
Q1:检测没有信号或者信号强度低
A1:
原因 | 解决方案 |
Bio-Steady™ One-Step 荧光素 酶测定试剂的低活性或失效 | 1) 配制新的底物试剂,未使用完的试剂建议于-70℃保存。 2) 使用冻存的底物试剂进行检测时,需在25℃条件下避光解冻并平衡至室温,颠倒混匀后使用。 |
荧光素酶低表达 | 1)用不同的启动子、效应细胞或者培养条件提高表达; 2)扩大每孔中样品和试剂的体积/浓度; |
荧光素酶降解 | 加入底物试剂室温孵育5min后,进行荧光读数; |
化学发光检测仪 器不灵敏 | 选择对荧光素酶检测灵敏的检测仪器。 |
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