背景：

支原体（Farbeplasma）是对支原体科、无胆甾原体科和螺原体科的原核微生物总称，是已知可以自由生活的最小生物，没有细胞壁，形状多样可变，直径一般是0.1～0.3μm，基因组A-T含量高，对常见的抗生素不敏感，对热敏感。目前已从污水、植物、动物、禽类、昆虫、人、温泉或其他高温环境中发现200种左右支原体。

细胞如果受到支原体污染，细胞生长速度变慢，细胞产生病变或形态改变。连续培养细胞污染的概率大约15～35%，主要来源于20多种支原体，包括口腔支原体（M.orale）、肺炎支原体（M.pneumoniae）、发酵支原体（M.fermentans）、精氨酸支原体（M.arginini）、莱氏无胆甾原体（A.laidlawii）和猪鼻支原体（M. hyorhinis）。

人员操作、污染的细胞、原辅料（血清、胰酶、培养基），实验环境污染（生物安全柜、细胞间，培养箱）、实验仪器（水浴锅、液氮罐）、实验耗材（培养皿、方瓶、细胞工厂）都可能是污染源。污染了的细胞一方面对生产带来巨大影响，另外如果细胞产品、蛋白产品、病毒类产品受到支原体污染，最终会给患者带来潜在的健康风险。因此，监管部门要求企业对细胞库，检定用细胞和产品进行支原体检测，从源头上进行控制，尽早发现，确保放行产品不含支原体。对此，全球各国药物监管部门也发布了支原体检测相关指南，检测方法主要包括POCT法、荧光染色法、培养法、核酸扩增等检测方法。

概述：

Rhinogen^® Myco-Farbe™ 快速支原体检测试剂盒是针对细胞培养物支原体污染快速检测的试剂，使用简单便捷，只需吸取1μl细胞培养液上清加入反应体系中，65℃孵育1小时，肉眼观察即可判定结果。无需PCR/qPCR仪，无需电泳，在细胞房内即可轻松完成。检测结果与目前最灵敏、最准确的qPCR法具有极高的一致性。本试剂盒可以检测多达62种支原体，其中包括细胞培养常见的8种支原体；适用于各种悬浮、贴壁培养细胞，包括CHO、Vero、杂交瘤、Sf9、293等，且具有广泛的培养基兼容性，因此非常适合于生物制药企业、疫苗生产企业、单抗生产企业、细胞治疗/胚胎实验室以及科研实验室的日常支原体检测。

试剂包装：

Rhinogen^® Myco-Farbe™ 快速支原体检测试剂盒包装规格如下：

产品特性：

1.操作简单：仅需60min即可检测细胞培养中是否有支原体污染；

2.特异性高：不会受到细菌、真菌、酵母的干扰；

3.污染性低：反应是在管内进行，反应后无需开盖进行检测，降低污染风险；

4.检测灵敏度高：能检测至少500cfu的支原体。

保存条件：

1. 使用冰袋运输，到货后请置于-20℃长期保存。尽量避免反复冻融。

2. 试剂使用前请恢复至室温。

Q1:孵育几个小时才变色，是阴性还是阳性？

A1:1）试剂盒为显色反应，超过60min显色不稳定，结果可信度下降； 2）如果怀疑细胞有支原体污染，可以将细胞传2-3代后重新测定，如果重新测定60 min并未有显色，说明没有支原体污染； 3）本试剂盒可以检测出细胞污染的常见支原体种类，对于少数怀疑可能有不能鉴定的支原体种类污染的、比较重要的细胞，推荐使用Rhinogen® MycoAlarm™支原体检测试剂盒（RA-MT01）进行双重检测。严格的支原体检测，需使用两种以上不同原理的方法同时检测，才能更有效地避免假阳性和假阴性。

Q2:操作过程中如何避免出现假阳性？

A2:1）实验操作时佩戴口罩，穿戴手套及实验服；2）等温扩增是超高灵敏度的检测，请尽量在标准的PCR实验室中进行检测；3）加样时注意更换枪头，建议将阳性对照放在最后一管加入；4）反应结束后，不能打开管盖，否则反应产物极易产生气溶胶污染；5）判断结果后，密封后按实验室废弃物处置要求进行处理。

Q3:加入样品后出现颜色差异？

A3:本产品含颜色指示剂，样品中不能含有高浓度的EDTA等金属离子螯合剂。未进行反应前，如果加入样品后颜色和阴性、阳性颜色有明显差异，则需要稀释样品或者适当调整样品的pH至接近中性，也可使用Rhinogen® Myco-EXT™支原体DNA提取纯化试剂盒（RA-MT04）处理样品。

Q4:试剂盒可以检测多少种支原体？

A4:本试剂盒可以扩增的支原体种类：

注意：黑标的为细胞培养过程中最常见的种类。