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背景:
抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC)是免疫系统对抗病毒感染及肿瘤疾病的一种重要免疫防御机制。抗体通过与靶细胞表面抗原特异性结合,招募如自然杀伤(Natural killer, NK)细胞等效应细胞杀死靶细胞。NK细胞表面表达FcγRIIIa蛋白,是一种抗体Fc区域的受体,能识别并结合抗体的Fc端,从而使NK细胞结合到靶细胞周围。一旦Fc受体与抗体的Fc区域结合,NK细胞就会释放细胞因子和细胞毒性颗粒,进入靶细胞触发细胞凋亡。传统的ADCC检测方法是利用外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)或者从其中分离得到NK细胞作为效应细胞进行检测,该方法的效应细胞较难获取,且方法变异性大、操作繁琐。
Rhinogen® ADCC Reporter Bioassay是一种生物发光报告基因检测方法,用于检测抗体的ADCC生物学活性。其作用机理基于NFAT(Nuclear factor of activated T-cells)反应通路(图NFAT应答元件驱动表达的萤火虫萤光素酶。抗体通过与效应细胞表面FcγRIIIa的结合,激发细胞内NFAT反应元件,NFAT反应元件则驱动萤火虫荧光素酶的表达。荧光素酶活性通过生物发光进行定量。
图1.Rhinogen® ADCC Reporter Bioassay原理图
包装规格:
目录号 | 规格 |
RA-CK01 | 1×1ml |
特点:
Rhinogen® ADCC报告基因检测系统提供的ADCC生物学活性检测方法操作具有操作简便(图2)、变异性低、灵敏度高等特点,并可与多种不同的靶细胞搭配使用。
1. 原理明确:基于抗体结合细胞对效应细胞FcγRIIIa受体信号通路的激活
2. 应用广泛:治疗性抗体药物的Fc功能学研究和产品质控、ADCC作用机制研究
3. 操作简便:检测过程简单,检测试剂易用
4. 适用性广:该系统已完成针对悬浮或贴壁的多种靶细胞的适用性验证,效果良好
5. 灵敏度高:可灵敏的检测到抗体糖型的改变
6. 稳定性好:传代30次仍可稳定灵敏检测,数据重复性好
Rhinogen® ADCC报告基因检测系统的各项特性使得其可作为抗体筛选、抗体糖基化修饰等研究的有效手段。同时,该法可作为抗体药物ADCC活性的常规检测方法及批签发检测指标。
图2.Rhinogen® ADCC Reporter Bioassay检测流程图
运输及储存:
运输方式:干冰运输
储 存:收到细胞后,请立即将ADCC Bioassay 效应细胞冻存管转移至-140°C以下的保存条件长期保存。
Q1:宿主细胞Jurkat细胞是否可溯源?
A1:是的,我们的Jurkat细胞是从ATCC 购买的,可溯源。
Q2:为什么选择NFAT响应元件?NFAT响应元件构建时有几个重叠?
A2:我们基因改造的宿主细胞Jurkat T细胞,细胞内带有NFAT 信号传导通路, 而我们的FcγRⅢa受体在与抗体的Fc区域特异性结合以后又能激活细胞 内的NFAT 信号传导通路,因此我们选择NFAT响应元件。 NFAT 响应元件构建时没有重叠,只有一个基因单元。
Q3:是否按照2015版《中国药典》规定的,对于检测用细胞株进行全面检定的COA文件?
A3:是的,我们完全按照药典的要求对ADCC测活细胞株进行质量控制,包 括无菌检查(无菌),支原体检测(支原体阴性)及对细胞进行功能性鉴 定,检定的COA 文件会和细胞同时提供。
Q4:对于效靶比的设置有推荐吗?
A4:具体效靶比数值须以实际检测优化后为准。初步摸索实验时,可先将效靶 比设置为1:3、3:1、 6:1,根据检测结果做进一步调整和确认。且因 酶标仪不同,响应值也会发生变化,因此建议更换设备后需再次进行效靶 比确定。
Q5:测活过程中,孵育时间为什么是6-24hr?
A5:抗体样本与ADCC效应细胞株表面的FcγRⅢa受体的亲和力不同,因此可 能不同的抗体样品最适的孵育时间不同。我们这里只是列的一个时间范 围,针对特定的抗体,孵育时间是需要进行适当的优化的。
Q6:你们ADCC检测系统目前已有的数据,信噪比怎么样?
A6:我们的ADCC检测系统适用于多种具ADCC功能活性抗体的生物学活性 检测,对于不同的抗体样品,由于抗体Fc端与效应细胞上FcγRⅢa的亲 和力不同,因此信噪比也不一样。
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