背景：

N-糖基化及O-糖基化是两种主要的糖基化修饰形式，N-连聚糖以三甘露五糖核心与蛋白质上的天冬酰胺（Asn）残基的酰胺侧链相连，而O-连聚糖以Core 1或Core 3的二糖核心与Ser或Thr残基的羟基侧链相连。这些N-或O-聚糖链上的末端残基通常都是唾液酸，对糖蛋白的糖基化研究必不可少的第一步通常都是除去所有非还原末端的唾液酸残基。α2-3,6,8,9 Neuraminidase能够释放糖蛋白，糖脂，神经节苷脂及多糖上所有直链或支链非还原末端的唾液酸残基。是一类重要的糖基化研究的工具酶，广泛用于糖蛋白和糖脂的分析。

Rhinogen^® α2-3,6,8,9 Neuraminidase是一种将α2-3,6,8,9 Neuraminidase 基因重组并表达于大肠杆菌BL21中的重组酶。在无糖苷酶本底表达的大肠杆菌宿主中表达的重组α2-3,6,8,9 Neuraminidase是高度纯化的酶制剂，能够释放α (2,3)-, α (2,6)-, α (2,8)-, α (2,9)-唾液酸残基，如图1，不同唾液酸残基的释放速率大致为α (2,6)-＞α (2,3)- ＞α (2,8)- ＞α (2,9)-，通过加入足够的酶，释放的速率差异并不影响它在实际应用中的完全非特异性去除唾液酸残基的性质。

图1. Rhinogen^® α2-3,6,8,9 Neuraminidase作用位点

产品包装：

Rhinogen^® α2-3,6,8,9 Neuraminidase包装规格如下：

储存体系：

QPF-005储存在缓冲液中，以液体的形式提供。缓冲液的组成为：50 mM NaCl，20 mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25°C)，1 mM EDTA。

配套试剂：

Rhinogen^® α2-3,6,8,9 Neuraminidase 提供的配套试剂如下：

产品来源：

Rhinogen^® α2-3,6,8,9 Neuraminidase是一种将α2-3,6,8,9 Neuraminidase基因重组并表达于大肠杆菌BL21中的重组酶，分子量大小为66KD。

产品质量：

SDS-PAGE分析，纯度≥95%；没有检测到污染的外切糖苷酶、内切糖苷酶及蛋白酶活性。

产品特性：

反应适宜pH范围：4.5-7，最适反应pH：5.5；热失活条件：65°C处理10 min。

酶活定义：

1个酶活力单位定义：在37°C，pH5.5条件下，以对硝基苯基-α-D-N-乙酰神经氨酸为底物，1分钟内催化释放1 μmol 对硝基苯酚所需要的酶量。

1U Rhinogen^® α2-3,6,8,9 Neuraminidase =1 U Prozyme Glyko^® Sialidase A^TM。不同公司产品的酶活力单位换算，请参考活力单位转换表，如下：

储存条件： 

-20℃条件下，避免反复冻融。

产品特点：

Rhinogen^® 提供的α2-3,6,8,9 Neuraminidase产品具有稳定性高、比活性高等特点，是一种高度纯化和非常稳定的外切糖苷酶，适用于蛋白质组学及糖生物学研究中糖蛋白上所有非还原末端的唾液酸残基有效释放。

1. 高纯度：没有污染蛋白酶/其它糖苷酶，纯度≥95％；

2. 高稳定性：每批α2-3,6,8,9 Neuraminidase产品都经过严格的质量控制，以实现高稳定性；

3. 高比活性：有效和完全的释放所有非还原末端的唾液酸残基。 

应用：

1. 聚糖结构分析；

2. 涉及唾液酸的病理生理学研究；

3. 治疗性重组蛋白的表征及质量控制；

4. 癌症研究及异常唾液酸化的鉴定及体外诊断；

5. 消除糖蛋白的异质性。

Q1:唾液酸酶有很多 种，Rhinogen® 的唾液酸酶跟市 面上的有什么区别？

A1:市面上常见的唾液酸酶有α2-3、 α2-3, 6-、α2-3,6,8-及 α2-3,6,8,9-等4种： 1） α2-3Neuraminidase 基因常常来源于Salmonella typhimurium LT2、Streptococcus pneumoniae 及 Pasteurella multocida，能够切割释放 α2-3连唾液酸残基； 2） α2-3, 6 Neuraminidase 基因常常来源于 Clostridium perfringens，能够切割释放 α2-3, α2-6 连唾液酸残基； 3） α2-3,6,8 Neuraminidase能够切割释放 α2-3, α2-6 , α2-8 连唾液酸残基； 4） α2-3,6,8,9 Neuraminidase 基因常常来源于Arthrobacter ureafaciens, 能够切割 释放α2-3, α2-6 , α2-8,  α2-9 连唾液酸残基，它还可以切割与内部残基连接的支链 唾液酸残基，Rhinogen®目前只有这一种唾液酸酶，是一种应用最广泛、适用性 更广的酶。

Q2:α2-3,6,8,9 Neuraminidase 有效的阳性对照 底物？

A2:Fetuin 或 pNP-N-乙酰神经氨酸是α2-3,6,8,9 Neuraminidase的有效阳性对照底物。

Q3:α2-3,6,8,9 Neuraminidase 可以同时与其他 外切糖苷酶和/或 内切糖苷酶进行 双重消化吗？

A3:是的，可以同时使用。 与其它外切糖苷酶同时使用时，建议采用1× Glyco缓冲液 1（50mM乙酸钠， 5mM CaCl 2，pH5.5）缓冲体系； 与PNGase F和/或O-Glycosidase同时使用时，建议使用1×Glyco缓冲液 2（50 mM磷酸钠，pH 7.5）。

Q4:是否有必要用 Neuraminidase 和O-Glycosidase 同时处理糖蛋白 样品？

A4:是的，对于含有 O-聚糖链的糖蛋白样品，必须首先去除末端唾液酸残基后， O-Glycosidase 才能有效去除O-连二糖核心。

Q5:Neuraminidase 对糖蛋白样品的 去唾液酸化是否 要求变性条件？

A5:不需要，通常去糖基化的酶都可以从天然（折叠）糖蛋白上去除聚糖残基，然 而由于空间位阻效应（蛋白质的二级或三级结构），聚糖位点周围的蛋白质可 能会影响一些酶的可及性，对于PNGase F 及O-Glycosidase，变性条件下去糖基 化效率会得到较大的提高，但是对于Neuraminidase，变性及天然状态下，去唾 液酸的效率相差不大。

Q6:在糖苷酶处理后 如何重新纯化聚 糖或糖肽？

A6:微型离心过滤器过滤收集或固相萃取（例如：石墨化碳柱）。